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大肠杆菌使用超声波破碎仪进行操作的效果如何

发布时间:2020-11-18 17:33   浏览:

  大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候用超声波破碎仪便能起到很好的效果,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌,下面来详细的了解一下吧。

  

  细菌沉淀直接加样品进行混匀、离心、煮沸后直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热,将染色液换成大量的水在微波炉煮就可以了。在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴 ,但是不一会就会产生大量泡沫,影响了破碎功率。
  
  在实验过程中若产生气泡是因为探头位置没有放好,探头一定要接近底部,约1cm。功率根据仪器不同也会有所不同,因此可以观察液面,注意有波动但不要太剧烈机好。变幅杆位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整,另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度不要超过60%。
  
  尝试超8秒,对有些菌体蛋白来说,很难散热,导致蛋白变性产生气泡,因此停留的时间要稍长一点,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。
  
  使用超声波破碎仪在做大肠柑橘超声时,采用400W,超5停5的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,似乎没有什么效果,可能死由于细胞壁组成差异造成的,因为大肠杆菌属于革兰氏阴性菌的。

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